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Isabella von Portugal, die im Jahr 1539 im Alter von 35 Jahren in Toledo verstarb, war als Ehefrau Karls V. sowohl Kaiserin des Heiligen Römischen Reiches als auch Königin von Spanien und Deutschland. Ihre Ehe mit Karl, die 1526 geschlossen wurde, machte sie zudem Herrin der Niederlande und Regentin Spaniens, da ihr Mann häufig auf Reisen war und sie so für die Unabhängigkeit des Königreichs sorgte. Isabella war eine Tochter von Manuel I. von Portugal und Maria von Aragón und wurde am 24. Oktober 1503 in Lissabon geboren. Nach ihrem Tod wurde sie im Pantheon der Könige in El Escorial beigesetzt.